4、离心去杂质碎片：将离心上清液转移至新的离心管中，于4℃ 以10,000 ×g（~9,500 rpm）离心10 min，去除样品中的杂质碎片；
5、上清液转移：去除杂质碎片的上清液转移到新离心管中。
二、提取外泌体
1、上清液预处理：在去除杂质的离心上清液中加入 Exosome Concentration Solution（ECS 试剂），具体的加入剂量如下：（其他剂量请根据表中的试剂用量等比例换算）
样品名称
样品剂量 加入 ECS 剂量
细胞培养上清液
20 mL 5 mL
2、溶液混合：加入 ECS 试剂后将离心管盖紧，涡旋振荡器混匀 1 min，再放置于 4℃ 静置 8 h 以上；（注：增加静置时间可提高外泌体得率，但静置时间不可超过24h。）
3、沉淀外泌体：取出装有混合液的离心管于 4℃ 以 10000 ×g （~9,500 rpm）离心 60 min，弃上清，沉淀中富含外泌体颗粒；（注：尽可能吸净上清液）
4、再次离心：将含有沉淀的离心管再次于 4℃ 以10,000 ×g（~9,500 rpm）离心2 min，弃上清（注：尽可能吸尽上清液）；
5、外泌体重悬：取合适量的 1×PBS 均匀吹打离心沉淀物，待其溶解后，将重悬液转移至新的 1.5 mL 离心管中（建议每 20 mL 细胞培养上清用 200 μL 左右 1×PBS 重悬）；
6、收获外泌体颗粒：将含有重悬液的 1.5 mL 离心管于 4℃ 以 12000 ×g （~12,400 rpm）离心 2 min，保留上清液，其中富含外泌体颗粒（注：若沉淀较多，可12,000 ×g，2 min 离心多次至无明显沉淀，每次取上清液）。
7 cm 有效离心半径的小离心机换算（≤2 mL 离心管），下同。
三、纯化外泌体
1、纯化外泌体：将收获的外泌体颗粒粗品转入 Exosome Purification Filter（EPF 柱）上室中，于 4℃ 以 3000 ×g （~6,200 rpm）离心 10 min，离心后收集 EPF 柱管底的液体，此液体即为纯化后的外泌体颗粒（注：EPF 柱不可重复使用）；
2、外泌体的保存：纯化后的外泌体以 50-100 μL 体积进行分装保存于 -80℃ 低温冰箱中，以备后继实验使用。